Implementación de un método molecular para la identificación de Mycoplasma pneumoniae resistente a macrólidos / Implementation of a molecular method for the detection of macrolide-resistant Mycoplasma pneumoniae

Introducción: Mycoplasma pneumoniae es causa frecuente de infecciones respiratorias en niños y jóvenes. Los macrólidos son la primera línea de tratamiento. La rápida emergencia de resistencia a estos antimicrobianos ha motivado el desarrollo de métodos moleculares para su detección en muestras clínicas positivas a este patógeno. Objetivo: Implementar un método de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (RT-PCR) para la detección de resistencia a macrólidos a partir de muestras clínicas positivas a M. pneumoniae. Métodos: Se implementó una RT-PCR para la detección de las mutaciones A2058G y A2059G en el ARNr 23S de M. pneumoniae. Se analizaron 24 muestras clínicas positivas a M. pneumoniae, que provenían de pacientes con síntomas respiratorios. Se evaluó la sensibilidad, especificidad, repetibilidad y reproducibilidad de la RT-PCR. Resultados: La RT-PCR mostró un 100 % de especificidad para M. pneumoniae y un 92 % de sensibilidad, con un límite de detección de 2 copias/µL, que equivale a 10 copias/reacción. Además, se demostró la reproducibilidad y repetibilidad de estos resultados. Se obtuvo una correcta identificación de los genotipos salvaje y mutante, correspondientes a cada control. De las muestras clínicas positivas a M. pneumoniae, el 77,3 % (17/22) se identificó como sensible a macrólidos y el 22,7 % (5/22) como resistente. Conclusiones: La alta sensibilidad y especificidad del método de RT-PCR implementado permite que el Laboratorio Nacional de Referencia de Micoplasmas del Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí cuente con un método eficaz para el diagnóstico de M. pneumoniae resistente a macrólidos.

Introduction: Mycoplasma pneumoniae is a common cause of respiratory track infections in children and young adults. Macrolides are the first-line treatment. The rapid emergence of resistance to these antimicrobials has motivated the development of molecular methods for their detection in clinical samples positive for this pathogen. Objective: To implement a real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) method for the detection of macrolide resistance in M. pneumoniae positive clinical samples. Methods: An RT-PCR was implemented to detect mutations A2058G and A2059G in 23S rRNA of M. pneumoniae. M. pneumoniae positive clinical samples from 24 patients with respiratory symptoms were analyzed. Sensitivity, specificity, repeatability and reproducibility of the RT-PCR assays were evaluated. Results: The RT-PCR assays showed 100% specificity to M. pneumoniae, and 92% sensitivity with a detection limit of 2 copies/µL, equivalent to 10 copies/reaction. Moreover, the repeatability and reproducibility of these results were demonstrated. Wild and mutant genotypes associated to each control were properly identified. Of the clinical samples positive for M. pneumoniae, 77.3% (17/22) were macrolide-sensitive and 22.7% (5/22) were macrolide-resistant. Conclusions: The high sensitivity and specificity of the RT-PCR method implemented provides the National Reference Laboratory of Mycoplasmas of the Institute of Tropical Medicine Pedro Kourí with an effective method for the diagnosis of macrolide-resistant M. pneumoniae.

Síndrome coqueluchoide y tosferina

RESUMEN Introducción: El síndrome coqueluchoide es una causa frecuente de ingreso y no siempre se descarta a la Bordetella pertussis como su origen. Objetivo: Identificar la etiología infecciosa en niños ingresados con síndrome coqueluchoide/coqueluche y su relación con el estado de la vacunación. Métodos: Estudio descriptivo, transversal, en 120 niños hasta 10 años de edad con diagnóstico de síndrome coqueluchoide ingresados en el Servicio de Neumología del Hospital Pediátrico "Juan Manuel Márquez", entre enero 2010 y septiembre 2012. Se evaluó la edad, sexo, evolución, resultados de reacción en cadena de la polimerasa y cultivo para virus, bacterias y micoplasmas en muestras obtenidas al ingreso, procesadas en el Instituto de Medicina Tropical, además, cumplimiento de vacunación antipertussis. Las variables cualitativas se describieron mediante frecuencias absolutas y porcentajes; para evaluar la relación tos ferina e incumplimiento de la vacunación se empleó la prueba Ji cuadrada con un nivel de significación de p≤ 0,05. Resultados: Predominaron los menores de un año (69,2 %) y el sexo femenino (55%). Bordetella pertussis se aisló en 71 casos (59,2 %); más frecuente en menores de 6 meses (59,7 %) y en niños con vacunación incompleta (80 %), pero no fue significativa la diferencia con los casos no pertussis (p=0,214).Existió coinfección con virus y micoplasmas (54-76 %). La etiología viral predominó en los restantes 49; rinovirus fue el más representado en general. Falleció una recién nacida con neumonía por B pertussis. Conclusiones: Ante un síndrome coqueluchoide debemos siempre tener presente la posibilidad de tos ferina, sobre todo en niños pequeños con vacunación incompleta.

ABSTRACT Introduction: Coqueluchoid syndrome is a frequent cause of admission and Bordetella pertussis is not always ruled out as its origin. Objective: Identify the infectious etiology in children admitted with coqueluchoid/coqueluche syndrome and its relationship with vaccination status. Methods: A descriptive, cross-sectional study was conducted in 120 children up to 10 years of age diagnosed with coqueluchoid syndrome admitted to the Pulmonology Service of "Juan Manuel Márquez" Children's Hospital between January 2010 and September 2012. Age, sex, evolution, polymerase chain reaction results and culture for viruses, bacteria and mycoplasmas were evaluated in samples obtained at admission, processed at the Institute of Tropical Medicine ; in addition to the compliance with anti-pertussis vaccination. Qualitative variables were described by absolute frequencies and percentages; to evaluate the ratio of whooping cough and non-compliance with vaccination, the Ji square test was used with a significance level of p≤ 0.05. Results: Children under one year of age (69.2%) and female sex (55%) predominated. Bordetella pertussis was isolated in 71 cases (59.2%); it was more frequent in children under 6 months (59.7%) and in children with incomplete vaccination (80%), but the difference with non-pertussis cases was not significant (p= 0.214). There was co-infection with viruses and mycoplasmas (54-76%). Viral etiology predominated in the remaining 49; rhinovirus was the most represented overall. A newborn died with B. pertussis pneumonia. Conclusions: In the face of a coqueluchoid syndrome we must always keep in mind the possibility of whooping cough, especially in young children with incomplete vaccination.